NOTA TÉCNICA

METODOLOGIAS PARA DETERMINAÇÃO DE

 CREATINO QUINASE FRAÇÃO MB (CK-MB)

Para efeito de esclarecimento e conhecimento geral, seguem abaixo considerações técnicas sobre as metodologias para determinação de Creatino Quinase-MB Cinética UV (CK-MB) versus Creatino Quinase MB Massa (CK-MB-massa) que, embora determinem o mesmo analito, possuem princípios e metodologias totalmente diferentes.

A Creatino Quinase (CK) é uma isoenzima presente no músculo (CK-M) e no cérebro (CK-B) e existe no soro na forma de dímeros como CK-MM, CKMB, CK-BB e macroenzimas. Uma vez que a CK-BB é praticamente ausente do soro e a CK-MM é ambundante, mas sabidamente de origem muscular, a dosagem de CK-MB é bastante específica para descoberta de danos do músculo cardíaco. Desta forma, a enzima CK-MB é clinicamente utilizada como suporte ao diagnóstico e monitoração de infarto agudo do miocárdio.

CK-MB Cinético UV com anticorpo monoclonal - BioTécnica

O método Creatino Quinase-MB Cinética UV (CK-MB) BioTécnica baseia-se na determinação da atividade enzimática da CK na presença de um anticorpo monoclonal contra o monômero M. Este anticorpo inibe totalmente a isoenzima CK-MM e a metade da atividade da forma CK-MB, sem afetar o monômero B das isoenzimas CK-MB e CK-BB. Como normalmente a isoenzima CK-BB não se encontra no sangue, a determinação da quantidade do monômero B é praticamente específica para a forma CK-MB.

A concentração catalítica de CK-B, correspondente então à metade da atividade CK-MB e é determinada empregando-se as reações acopladas da hexoquinase (HK) e Glicose-6-fosfato desidrogenase (G6P-DH), a partir da velocidade de formação do NADPH, medido em 340 nm.

O resultado para o método CKMB cinético UV é dado em unidades de atividade catalítica por litro (U/L), a faixa de referência clínica para pacientes normais é menor que 25 U/L e se baseia nas bibliografias abaixo, aceitas mundialmente como referência:

1 - International Federation of Clinical Chemistry Clinica Chimica Acta. 105:147F (1980).

2 - Schumann, G., et al. IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37°C. Part 2. Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of creatine kinase. Clin Chem Lab Med. 40: 635-42 (2002).

CK-MB massa

O método CK-MB massa consiste num imunoensaio de uma só etapa, baseado o princípio de “sandwich”. A amostra é incubada com partículas de dióxido de crômio, revestidas com anticorpos monoclonais específicos para a subunidade CKB, e com o reagente conjugado (anticorpos monoclonais específicos para a isoenzima CKMB marcados com ß-galactosidase). Durante o período de incubação forma-se um “sandwich” partícula/CKMB/conjugado. O conjugado não ligado é removido por separação magnética e lavagem. A ß-galactosidase ligada ao “sandwich” é combinada então com um substrato cromo gênico Galactopiranosídeo vermelho-ß-D-clorofenol (CPRG). A hidrólise do CPRG liberta o cromóforo (CPR). A concentração de CKMB presente na amostra do doente é então diretamente proporcional à velocidade de alteração de cor devida à formação de CPR medida a 577 nm. A quantidade de proteína CKMB é medida imunologicamente e os resultados são indicados em unidades de massa (ng/mL ou ug/L).

 

O resultado para o método CKMB-MASSA é dado em nano gramas por mililitro (ng/ml), a faixa de referência clínica para pacientes normais é menor que 5,3 ng/mL e se baseia na bibliografia abaixo, aceita mundialmente como referência:

1 - Birkmeyer R C, Diaco R, Hutson DK., et al. Applications of Novel Chromiumdioxide Magnetic Particles to Immunoassay Development. Clin Chem 1987;33:1543-1547.

Portanto, enquanto na dosagem de CK-MB Cinética UV é determinada a atividade da enzima, o teste de CK-MB massa detecta sua quantidade, independentemente de sua atividade, detectando, portanto enzimas ativas e inativas.